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domingo, 3 de junio de 2012

Determinación de Mohos y Levaduras

Los hongos y las levaduras se encuentran ampliamente distribuidos en elambiente, pueden encontrarse como flora normal de un alimento, o como contaminantes en los equipos. Ciertas especies de hongos y levaduras sonútiles en la elaboración de algunos alimentos, sin embargo también puedenser causantes de la descomposición de otros alimentos. 

OBJETIVOS GENERALES

Realizar el recuento de mohos y levaduras presentes en un alimento
Realizar el recuento de esporas de
Clostridiumsulfito reductorpresentes en un alimento.

Específicos
Realizar adecuadamente mediante el método de cuenta en placa, elnúmero de mohos y levaduras viables presentes en productos alimenticios destinados al consumo humano
.
•Determinar eidentificar la presencia de esporas deClostridiumsulfitoreductor a partir de productos cárnicos 

PROCEDIMIENTO
Se prepararon diluciones logarítmicas a base 10 (10-
1,10-2y 10-3).Semarco un frasco como dilución
101y se adicionaron 90ml de aguapeptonada al 0.1%; marcamos dos tubos de vidrio tapa rosca como10-2y dilución10-3y adicionamos 9ml de agua peptona da al 0.1%.

Dilución 10-1: pesamos 10g del alimento (cande de cerdo) y loagregamos al frasco marcado como dilución10-1y mesclamos hastahomogenizar la mezcla.

Dilución 10-2:tomamos 1ml de la dilución10-1y lo agregamos al tubomarcado como10-2yse mesclo hasta homogenizar.

Dilución 10-3:tomó 1ml de la dilución anterior y se agrego al tubomarcado como10-3

Obteniendo así las tres diluciones:
 A partir de estas tres diluciones realizamos la determinación para mohos ylevaduras y la determinación de esporas deClostridiumsulfito reductor.

1. Determinación de mohos y levaduras en carne de cerdo.
Se realizaron siembras en profundidad, para esto tomamos 3 cajas depetri estériles y las marcamos como10-1,10-2y 10-3.
 Mezclamos unas diez veces con la pipeta de la dilución
10-1y tomamos 1ml de esta dilución y lo adicionamos en la caja marcada como10-1 mezclamos de igual forma con la pipeta marcada como
10-2y tomamos 1ml de la dilución 10-2y lo adicionamos en la caja marcada con la mismadiluciónde la misma forma se tomó 1ml de la dilución10-3y fueronagregados a la caja marcada como10-3.
Adicionamos 15ml de agar Extracto de malta-oxitetraciclina (OGY) fundido a 45°C a cada una de las cajas.

Una vez agregado el agar mezclamos varias veces en forma de ochosen dirección de las manecillas del reloj con el fin de que se produzcauna distribución homogénea de la muestra en el medio de cultivo, sedejó en reposo para que se solidificara el agar y se incubaron a 22°Cpor 7 días.
2. Determinación de esporas deClostridiumsulfito reductor.
Para la determinación deClostridiumsulfito reductor se realizo por dosmétodos. Recuento en placa y recuento en tubo.

Recuento en placa.
 Tomamos tres cajas de petri estériles las cuales marcamoscomo10-1,10-2y 10-3.

Luego con una pipeta tomamos 1ml de las diluciones preparadasanteriormente y se agregaron a cada una de las respectivas cajas de petri.Posteriormente agregamos 15ml de agar SPS fundido a 45°C en cada unade las cajas, se mezclaron de igual forma que el procedimiento anterior ydejamos solidificar.Colocamos las cajas con las tapas hacia arriba en la jarra de anaerobiosis yse incubaron a 37°C por 48 horas.

Recuento en tubo.
Marcamos tres tubos como 10-1,10-2 y 10-3.
Tomamos 1ml de la dilución 10-1 y se los agregamos al tubo marcado de igual, de igual forma con la pipeta marcada como 10-2 tomamos 1ml de la dilución10-2 y lo adicionamos en el tubo de esta misma dilución de la misma forma se tomó 1ml de la dilución 10- 3 y se agregaron al tubo marcado como 10.
3. Después procedimos a calentar los tubos en baño serológico a 80°C por 10minutos, pasados estos enfriemos los tubos en un beaker con agua y hielo. Una vez fríos les agregamos 12 ml de agar SPS fundido a 45°C en cada unode los tubos y lo dejamos solidificar, para luego agregar una segunda capade 3ml de agar SPS fundido a 45°C.Se incubaron en anaerobiosis a 37°C por 72horas.



 RESULTADOS
Recuento de mohos y levaduras.
Pasados los 5 días de incubación se procedió a evaluar el crecimiento de las colonias.

 Dilución 10-1:
presento crecimiento de colonias de aspecto mucoidecompatibles con levaduras mayor de 300 UFC. Y el crecimiento de 9colonias de aspecto filamentoso compatibles con mohos




 Dilución 10-2:esta dilución presento un crecimiento similar al de ladilución anterior siendo las colonias de aspecto mucoide mayores de 300UFC y las colonias de hongos filamentosos se redujeron a 2 UFC.

Dilución 10-3:es esta dilución se observó el crecimiento conglomeradode colonias de aspecto mucoide, imposibilitando se recuento.


Recuento de esporasClostridiumsulfito reductor.

•Recuento en placa
Al revisar los medios de las distintas diluciones no se observo crecimientode colonias negras características deClostridium.
En ninguna de estas. Sinembargo se observo e crecimiento de colonias bancas cremosas y otras decolor amarillo claro en todas las siembras.

Recuento en tubo
No se observo crecimiento de ningún tipo de colonia.




¿Cual es la importancia de la determinación de mohos y levaduras y en que tipo de alimentos se determinan?

El papel de los mohos y las levaduras es secundario en la contaminaciónmicrobiana de alimentos, las condiciones ambientales de preservación deestos, que tienden a inhibir el crecimiento de bacterias, han favorecido laaparición de levaduras contaminantes, causantes igualmente deafectaciones en los parámetros organolépticos de buena calidad enalimentos frescos, semi-elaborados y elaborados. La importancia de estosmicroorganismos es que Las levaduras alteradoras de alimentos, se definencomo especies particulares capaces de causar deterioro en alimentos ybebidas que han sido procesados y empacados según las Normas de BuenasPrácticas para producción, manejo y empaque de los alimentos.Estas se determinan en alimentos de origen vegetal, frutos, verduras ygranos; productos de panadería; alimentos elaborados en salmueras yácidos; leche y productos lácteos; así como carnes frescas y curadas.

CONCLUSIÓN
 La determinación de mohos y levaduras en muy importante en la industria alimenticias ya que estos son agentes que deterioran los alimentos y causan perdidas materiales y monetarias.


Vídeos


Levaduras
 mohos



BIBLIOGRAFIA

GAMAZO Carlos y LOPEZ GOÑI Ignacio. Manual Practico de Microbiología. 3ra Edición. Ed. MASSON

.PASCUAL ANDERSON María del Rosario y CALDERON Vicente. Microbiología Alimentaria Metodología Analítica para Alimentos y Bebidas. 2da Edición.
http://es.scribd.com/doc/21561682/Recuento-de-Mohos-y-Levaduras









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