Determinación de Proteínas

Método Kjeldahl

-          ALCANCE Y CAMPO DE APLICACIÓN

El método es aplicable a alimentos en general.

-         FUNDAMENTO

El método se basa en la destrucción de la materia orgánica con ácido sulfúrico concentrado,

formándose sulfato de amonio que en exceso de hidróxido de sodio libera amoníaco, el que

se destila recibiéndolo en:

a) Acido sulfúrico donde se forma sulfato de amonio y el exceso de ácido es valorado con

hidróxido de sodio en presencia de rojo de metilo, o

b) Acido bórico formándose borato de amonio el que se valora con ácido clorhídrico.

- MATERIAL Y EQUIPO

1.- Balanza analítica, sensibilidad 0.1 mg.

2.- Equipo Kjeldahl

3.- Manto calefactor

4.- pHmetro

5.- Material usual de laboratorio.

-  REACTIVOS

1.- Acido sulfúrico concentrado, p.a.

2.- Sulfato de potasio o sulfato de sodio, p.a.

3.- Sulfato cúprico, p.a.

4.- Solución de hidróxido de sodio al 15 % . Disolver 150 g de NaOH y completar a 1 litro.

5.- Solución de  ácido sulfúrico 0.1 N. Tomar 2.7 mL de H2SO4 conc. y completar a 1 litro, luego estandarizar con Na 2CO3 anhidro p.a.

6.- Solución de hidróxido de sodio al 30 %. Disolver 300 g de NaOH y completar a 1 litro.

7.- Solución indicadora de rojo de metilo al 1 % en etanol. Disolver 1 g de rojo de metilo en

100 mL de etanol (95 %).

8.- Solución de hidróxido de sodio 0.1 N. Tomar 4 g de NaOH y enrasar a 1 litro con agua

recientemente hervida y enfriada. Valorar con  ácido succínico.

9.- Acido bórico al 3 % . Disolver 30 g de  ácido bórico y completar a 1 litro.

10.- Indicador de Tashiro: rojo de metilo al 0.1 % y azul de metileno al 0.1 % en relación de

2:1, en alcohol etílico.

11.- Solución de  ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar 8.3 mL de HCl conc. y enrasar a 1 litro.

Valorar con Na 2CO3 anhidro.

- PROCEDIMIENTO

1.- Realizar la muestra en duplicado.

2.- Efectuar un ensayo en blanco usando una sustancia orgánica sin nitrógeno (sacarosa) que

sea capaz de provocar la reducción de los derivados nítricos y nitrosos eventualmente

presentes en los reactivos.

3.- Pesar al 0.1 mg. alrededor de 1 g de muestra homogeneizada (m) en un matraz de digestión

Kjeldahl.

4.- Agregar 3 perlas de vidrio, 10 g de sulfato de potasio o sulfato de sodio, 0.5 g de sulfato

cúprico y 20 mL de  ácido sulfúrico conc.

5.- Conectar el matraz a la trampa de absorción que contiene 250 mL de hidróxido de sodio al

15 %. El disco poroso produce la división de los humos en finas burbujas con el fin de

facilitar la absorción y para que tenga una duración prolongada debe ser limpiado con

regularidad antes del uso. Los depósitos de sulfito sódico se eliminan con  ácido clorhídrico.

Cuando la solución de hidróxido de sodio al 15 % adicionada de fenolftaleína contenida en

la trampa de absorción permanece incolora debe ser cambiada (aprox. 3 análisis ).

6.- Calentar en manta calefactora y una vez que la solución esté transparente, dejar en ebullición

15 a 20 min. más. Si la muestra tiende a formar espuma agregar  ácido esteárico o gotas de

silicona antiespumante y comenzar el calentamiento lentamente.

7.- Enfriar y agregar 200 mL de agua.

8.- Conectar el matraz al aparato de destilación, agregar lentamente 100 mL de NaOH al 30 %

por el embudo, y cerrar la llave.

9.- Destilar no menos de 150 mL en un matraz que lleve sumergido el extremo del refrigerante o

tubo colector en:

a) 50 mL de una solución de  ácido sulfúrico 0.1 N, 4 a 5 gotas de rojo de metilo y 50 mL

de agua destilada. Asegurar un exceso de H2SO4

para que se pueda realizar la

retrotitulación.Titular el exceso de ácido con NaOH 0.1 N hasta color amarillo o

b) 50 mL de  ácido bórico al 3 %. Titular con  ácido clorhídrico 0.1 N hasta pH 4.6

mediante un medidor de pH calibrado con soluciones tampón pH 4 y pH 7, o en presencia

del indicador de Tashiro hasta pH 4.6

Cada cierto tiempo es necesario verificar la hermeticidad del equipo de destilación usando

10 mL de una solución de sulfato de amonio 0.1 N (6.6077 g/L), 100 mL de agua destilada

y 1 a 2 gotas de hidróxido de sodio al 30 % para liberar el amoníaco, así como también verificar la recuperación destruyendo la materia orgánica  de 0.25 g de L(-)-Tirosina. El

Contenido teórico en nitrógeno de este producto es de 7.73 %. Debe recuperarse un 99.7 %

-          CALCULO Y  EXPRESIÓN DE RESULTADOS

                                  14 x N x V x 100 x factor

7.2.-   % Proteína =---------------------------------

                                          m x 1000

NOTICIAS

Organizan ensayo interlaboratorio de determinación de proteínas procesadas

Nuevo método de determinación de estructuras de proteínas

IMÁGENES

VÍDEOS

Método Kjeldahl

CONCLUCIONES

en la determinacion de priteinas aprendimos que se puede realizar por varios metodos los cuales son muy utiles para poder comprovar que cantidad de priteinas contiene cada alimento que se va a consumir.

 BIBLIOGRAFIA

http://www.blogger.com/goog_287197

http://www.blogger.com/goog_287197

 http://www.grupo-selecta.com/notasdeaplicaciones/analisis-alimentarios-y-de-aguas-nutritional-and-water-analysis/determinacion-de-proteinas-por-el-metodo-de-kjeldahl-kjeldahl-method-for-protein-determination/

http://es.scribd.com/doc/11323090/Determinacion-de-Proteinas

http://webpages.ull.es/users/bioquibi/practicas/3.pdf